从采样到送检，肿瘤基因检测中的常见问题答疑!

　　组织标本是肿瘤基因检测的“金标准”，然而，在组织样本(包括新鲜手术组织、新鲜穿刺组织、蜡块、石蜡切片)和血液样本送检过程中，可能会遇到许多细节上的问题。因此，我们整理了样本采集与送检过程中的常见问题，供大家参考!

　　Q1、样本检测周期如何计算?

　　答：样本检测周期从实验室接收到的第二天开始计算。

　　Q2、样本DNA质检不合格会对后续检测结果造成影响吗?

　　答：样本DNA质检不合格若继续检测会影响测序数据质量，如覆盖度，特异性等。如果客户反馈样本DNA质检不合格仍坚持继续检测，则需承担后续检测异常风险。

　　Q3、血液样本采集可以使用EDTA抗凝管吗?

　　答：EDTA 抗凝管可用于血液样本采集，但根据检测项目不同需斟酌选择使用，详情如下：

　　① 当患者检测遗传筛查类产品、化疗药物基因多态性检测产品、结直肠癌预后评估-MSI 检测产品、安全用药基因检测类产品、酒精，咖啡因代谢类产品、吸烟引发肺癌风险基因检测产品，叶酸代谢能力检测产品，遗传耳聋基因检测产品，个人健康全基因组检测产品时，可以使用 EDTA 抗凝管采集血液样本。

　　② 当患者检测液体活检早筛及早诊产品、精准用药类血检产品、实时监控类产品时(即检测 cfDNA 时)，不可使用 EDTA 抗凝管采血。因使用 EDTA 抗凝管采血必须在 4 小时内分离血浆，为保证样本检测质量，要求使用游离DNA管采集血样。其他采血管未进行严谨的实验对比，无法确保其效果和质量。

　　Q4、液体活检类产品采血量必须是10ml吗?

　　答：液体活检类产品基于两大检测平台：高通量测序平台及ddPCR平台。

　　为了保证单点检测灵敏度，基于NGS检测平台的产品需10ml外周血。基于ddPCR检测平台的产品每两个位点需10ml外周血。

　　Q5、造成溶血的主要原因是什么?

　　答：溶血的原因主要有以下几点：

　　① 温度过高或者过低，被冷冻过的血液肯定会溶血

　　② 剧烈晃动

　　③ 使用移液器进行血液转移易造成溶血

　　Q6、全血样本采血后造成凝血的原因是什么?

　　答：采血后需立即轻轻倒转8至10次，使采血管内血液与抗凝剂充分混匀。采血管内抗凝剂和血液没有混匀是造成凝血最主要的原因。

　　实例：采血后没有立即颠倒混匀，样本到达后依然能分辨出抗凝剂和血液之间的分层界限，样本已经凝血。

　　Q7、血液样本发生溶血后对检测结果有何影响?

　　答：溶血是因为红细胞细胞膜的破裂而导致的红细胞破解、血红蛋白溢出的现象。血液样本发生溶血后，提取的cfDNA 内含有大量的基因组DNA，导致灵敏度大幅度降低。

　　比如某一位点突变率为1%，也就是1000个拷贝有10个拷贝是突变的，如果掺入了大量的基因组DNA，可能导致 1000个拷贝里面有1-2个拷贝是突变的，导致检出率下降。

　　Q8、血液样本超期对检测结果有何影响?

　　答：CTC检测的血液样本超期：

　　1.离体细胞的半衰期较短，如果超过规定送样时间，较大比例的血细胞将会死亡，细胞在死亡的时候溶酶体中的水解酶会破坏细胞内结构;

　　2.样本超期，细胞抗原会发生弥散，形态结构也会发生改变。影响CTC结果，从而无法保证结果的准确性。

　　血浆类检测的血液样本超期溶血，会造成不同程度的基因组DNA释放入血液，将会稀释阳性突变的频率，导致可能的假阴性。

　　Q9、如何判断样本质量是否合格?

　　答：首先从送样数量/体积、外观、时间、寄送温度等方面，判断是否符合相应检测项目的送样标准。

　　合格的样本将进行核酸提取，并根据检测项目需要进行核酸浓度、纯度、片段大小、降解程度等不同方面的质检，通过质量标准判断样本是否合格。

　　Q10、对于不合格样本的处理办法?

　　答：如果不合格情况属于轻微，则可告知销售与客户沟通进行风险告知，然后走风险放行流程;

　　如果严重不合格(样本脱片，样本严重溶血)，则需要销售内勤沟通重新送样。

　　Q11、NGS检测项目可否用EDTA管采血?

　　答：若4-6小时内能及时进行血浆分离，可使用EDTA管采血;超出时间则不可。

　　Q12、血浆运输的注意事项有哪些?

　　答：血浆运输没有明确的运输要求，但是根据cfDNA易降解的特点，运输途中应保证温度尽可能低，运输时间尽可能短。最好是干冰寄送。

　　Q13、化疗、放疗后多久可以采血做检测?

　　答：① 静脉化疗/放疗结束两周后，可进行采血做肿瘤基因检测;

　　② 静脉化疗/放疗下一周期前三天内，可进行采血做循环肿瘤细胞检测。

　　Q14、手术后可否采血做检测?

　　答：术后7天后可进行循环肿瘤细胞检测。

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